PCR技術(shù)(Polymerasechainreaction,PCR)是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的英文簡稱。
它是分子生物學(xué)中應(yīng)用最為廣泛的實驗方法之一。
它由DNA重組、RNA的合成和蛋白質(zhì)的體外重組等3個部分組成,
其中最重要的是PCR-DNA重組和PCR-蛋白質(zhì)合成兩部分。
PCR技術(shù)的基本原理:在特異引物的引導(dǎo)下與靶序列互補的特異性單鏈核苷酸序列以自身為模板,按堿基配對原則形成一條多核苷酸鏈,然后使這條單鏈沿著模板移動一段隨機距離后與靶標(biāo)dna結(jié)合即得到目的產(chǎn)物(mrna或蛋白)。
基因擴(kuò)增的原理:將外源基因通過限制性內(nèi)切酶的消化作用切割成小片段后導(dǎo)入細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng);經(jīng)過一定時間培養(yǎng)后,由于外源基因的表達(dá)而使得細(xì)胞產(chǎn)生大量的轉(zhuǎn)化子;再把這些轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)入特定的載體中進(jìn)行表達(dá)操作;最后把表達(dá)的產(chǎn)物用特定的方法從受體細(xì)胞的細(xì)胞膜上洗脫下來從而獲得目的基因的表達(dá)產(chǎn)物。